無塵無菌車間環(huán)境快速測定法

1.無塵無菌車間菌落染色法

在含有氧化還原顯色試劑四唑嗡紫羅蘭等的瓊脂平板培養(yǎng)基上培養(yǎng)微生物，或者在普通的瓊脂平板培養(yǎng)基上培養(yǎng)后，經(jīng)過染色，很容易判別菌落，是一種比標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)時(shí)間更短的計(jì)測菌落的方法。

微觀染色用于對培養(yǎng)結(jié)束的膜過濾器直接滴下染色液，然后讓其干燥，將染成青色的菌落拿到10~20倍的放大鏡下進(jìn)行計(jì)測。培養(yǎng)時(shí)間可以縮短到原來方法的1/2~1/40。例如：大腸菌經(jīng)過4~6h的培養(yǎng)就可以檢測出來。

2.阻抗法

微生物在增殖過程中會將蛋白質(zhì)、碳水化合物等高分子化合物分解成有機(jī)酸、氨基酸等離子化合物，這些離子化合物達(dá)到一定濃度，在周圍環(huán)境中將產(chǎn)生微小的電量變化。將這個(gè)電量的變化利用電阻、導(dǎo)電性或者靜電容量這些概念檢測的方法，稱作阻抗法。產(chǎn)生電量變化的時(shí)間與開始時(shí)的細(xì)菌數(shù)、菌的增殖性成反比，因此從預(yù)先求得的兩者的標(biāo)準(zhǔn)曲線中可以推算出樣品中初始的細(xì)菌數(shù)。作為產(chǎn)品化的系統(tǒng)有氣壓(或液壓)傳輸系統(tǒng)以及細(xì)菌計(jì)數(shù)器。

實(shí)際操作如下：向?qū)Ｓ萌萜髦刑砑右后w培養(yǎng)基和樣品，放在組成系統(tǒng)的培養(yǎng)裝置中，開始培養(yǎng)。測定機(jī)逐時(shí)自動(dòng)監(jiān)測培養(yǎng)過程中電量的變化。

本測定方法須培養(yǎng)，但它和原來計(jì)測菌落的方法相比，優(yōu)點(diǎn)在于培養(yǎng)時(shí)間可以縮短。培養(yǎng)開始后直到結(jié)果的打印輸出完全自動(dòng)化，初投資高但運(yùn)行費(fèi)用低，另外通過組合選擇性培養(yǎng)基，還可應(yīng)用于檢測特定微生物。

3.氧化電極法

氧化電極法是一種將微生物增殖過程中的呼吸活性，通過氧化電極檢出的方法。和阻抗法一樣，通過自動(dòng)監(jiān)測，隨著培養(yǎng)進(jìn)度逐時(shí)地測定，所產(chǎn)生的培養(yǎng)基中溶解氧的濃度，直到能夠檢出呼吸活性的培養(yǎng)時(shí)間，從這一時(shí)間推算樣品中的開始菌數(shù)。

測定時(shí)向裝有氧化電極的專用容器中添加液體培養(yǎng)基和樣品，然后放在組成系統(tǒng)的培養(yǎng)裝置中開始培養(yǎng)，測定機(jī)自動(dòng)監(jiān)測培養(yǎng)基中溶解氧濃度的逐時(shí)變化。6h內(nèi)就可以檢出105CFU/g的開始菌數(shù)。

4.無塵無菌車間顯色法

顯色法是一種通過標(biāo)識色素的色調(diào)變化，來檢測隨微生物代謝產(chǎn)生的培養(yǎng)基pH值的變化和CO₂生成的方法。通過自動(dòng)監(jiān)測檢測出培養(yǎng)過程中標(biāo)識色素的色調(diào)變化，從直到可以檢測出色調(diào)變化的這一段培養(yǎng)時(shí)間推算出樣品中的開始菌數(shù)。以培養(yǎng)基pH值變化為指標(biāo)的維夫斯、以CO₂生成為指標(biāo)的敏化培養(yǎng)基/生物材料都已產(chǎn)品化。中凈環(huán)球凈化可提供無塵車間、無菌車間的咨詢、規(guī)劃、設(shè)計(jì)、施工、安裝改造等配套服務(wù)。

以上4種方法仍需培養(yǎng)，只是培養(yǎng)時(shí)間較傳統(tǒng)方式縮短，有助于改善生物污染控制的工作效率，屬于一類。以下幾種方法則無需培養(yǎng)，屬于另一類環(huán)境微生物快速測定法。

5.熒光染色法

利用熒光染色劑熒光染色細(xì)胞膜和細(xì)胞核等，使用熒光顯微鏡等檢出方法。染色機(jī)理不同的多種熒光染色劑，根據(jù)不同的組合也能識別出。染色掃描RDI及D計(jì)數(shù)、真菌監(jiān)視器掃描、生物絮凝等都已產(chǎn)品化。

染色掃描RDI在薄膜過濾器上過濾樣品，熒光染色被阻擋在薄膜過濾器上的微生物后，再進(jìn)行激光掃描。熒光染色的30min，激光掃描3min即可結(jié)束。其結(jié)果可以作為圖像表示在監(jiān)測器畫面上，也可以自動(dòng)計(jì)測產(chǎn)生熒光的點(diǎn)數(shù)。D計(jì)數(shù)以及真菌監(jiān)視器掃描是結(jié)合了熒光染色法與流體檢查計(jì)數(shù)法的方法，可以連續(xù)測定液態(tài)樣品。

6.SLP(Silkworm Larvae Plasma)試驗(yàn)法

SLP試驗(yàn)法是利用蠶血液成分檢出肽聚糖及β-葡聚糖(多縮葡萄糖)的方法。肽聚糖是細(xì)菌的細(xì)胞壁成分，β-葡聚糖是真菌的細(xì)胞壁成分，因此通過本試驗(yàn)法能夠檢出這些微生物。不過每個(gè)微生物的肽聚糖及β-葡聚糖含量因菌株的不同而差異很大，與LAL試驗(yàn)法一樣，不能定量微生物，而且也不能識別出是來源于活菌還是來源于菌。

7.無塵無菌車間ATP(Adenosine Triphos Phate)快速測定法

ATP是高能磷酸化合物，分解時(shí)產(chǎn)生的能量用于細(xì)胞內(nèi)各種有能量需求的反應(yīng)。即ATP在所有活著的細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮著類似于電池的功能，它的存在成為生命活動(dòng)的證據(jù)。

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